重組人CKMM同工酶ERM-AD455在不同保存基質中的穩定性和互通性觀察：

重組酶應用時對其穩定性有嚴格的要求。研 究對酶溶液 -20℃ 冷凍保存的穩定性做了初步觀 察,發現未加穩定劑時重組酶活性喪失很快。在含 有 ＢＳＡ、ＤＴＴ和 ＥＤＴＡ的基質中保存于 -20℃或在 具以上穩定劑基質中加入抗凍劑丙二醇,重組 CKMM同工酶的穩定性相對較好,仿 ＣＲＭ 配方基質中重組酶 的短期 穩 定 性 也 較 好,保 存 時 間 與 Ｒｏｃｈｅ公 司 產 ｃｆａｓ校準品復溶后冷凍保存穩定時間接近。一般認 為人血清作為參考品基質其基質效應小，研究將 重組CKMM同工酶保存于人血清中,穩定性不好,可能是 人血清中含有蛋白水解酶或抑制物等,更易造成酶 失活。酶的CKMM同工酶ERM-AD455都是凍干品,其穩定期長,以凍干 品的形式長期保存酶參考品應該是可行的方法。

 羅氏和中生北控 ＣＫ常規測定方法對 ＩＦＣＣ參 考方法做相關回歸發現,無論在 CKMM同工酶還是在 ＣＫ- ＭＢ升高組常規方法與參考方法間具良好的兩兩相 關性,相關系數大于 0.99。但兩組樣本用羅氏方法 測定的結果比參考方法分別偏高 1.96%和 2.23%, 而中生 北 控 的 方 法 的 測 定 值 比 參 考 方 法 分 別 低 8.63%和 10.29%。顯 然,經 過 溯 源 校 準 的 羅 氏 試 劑測定的準確度明顯優于只 采 用 Ｋ值 輸 入 而 未 經校準品校準的中生北控國產試劑。 

研究觀 察 了 保 存 于 自 配 基 質、抗 凍 基 質、仿 CKMM同工酶ERM-AD455配方基質和人血清基質中重組 CKMM同工酶的互通 性。結果自制基質和仿 ＣＲＭ配方基質中的重組酶, 在高、中、低不同水平時都具有良好的互通性,而抗 凍基質和人血清基質配方中的重組酶只有位于診斷 限附近的低值有互通性。我們對重組酶的酶動力學 研究發現,底 物 磷 酸 肌 酸 的 米 氏 常 數 (Ｋｍ)重 組 酶 明顯高于天然酶,因此在現有測定方法下重組酶的 測定上限低于天然酶,這可能是高濃度值互通性差 的重要原因之一 。

綜合對重組酶穩定性和互通性的研究發現,加 入穩定劑的類人血清自制基質和仿 CKMM同工酶ERM-AD455 配方基質 中保存的重組酶具有較好的應用前景。為保證其穩 定性,需進一步制備凍干品,并觀察凍干品在不同保 存溫度的穩定性。該重組酶真正作為 ＣＫ候選參考 物質應用于臨床還有許多問題需要解決,包括冷凍 干燥品復溶后的穩定性和互通性,將此重組酶作為 參考品并予以賦值用于常規測定的校準 能否減 小室間變異等,都需要進一步觀察。

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