WHO世界衛生組織國際標準

NIBSC 18/164，ATDB102 參考基因組（第一國際標準）

1. 預期用途

NIBSC 18/164 ATDB102 參考基因組是從 ATDB102 人類細胞系中提取的冷凍干燥、純化的基因組 DNA (gDNA)。該材料已被證明是 PIK3CA c.1633G>A (E545K)、TP53 c.916C>T (R306*)、NRAS c.34G>T (G12C)、PTEN c.795delA (K267fs*9) 的野生型和 MAP2K1/MEK1 c.199G>A (D67N) 變體，并且是 PIK3CA、TP53、NRAS、PTEN、MAP2K1/MEK1 的純合野生型。該材料可用作 HCT 15 和 MOLT-4 癌癥基因組（NIBSC 材料代碼 18/118 和 18/130）第一國際標準 2019 中上述變體的通用參考和稀釋劑。材料 18/118 和 18/130 的使用說明中提供了有關如何使用該材料作為稀釋劑的詳細信息。該材料旨在用作校準二級標準、試劑盒和分析的一級標準。該材料不用作運行控制。該材料由外部實驗室測試，顯示適合作為下一代測序 (NGS) 和數字 PCR (dPCR) 的標準。該材料還包含可用于驗證 NGS 檢測的非臨床相關變體（參見附錄 I）。該材料由世界衛生組織 (WHO) 生物標準化專家委員會于 2019 年制定為 WHO 第一個 ATDB102 參考基因組國際標準，NIBSC 材料代碼 18/164。

2. 注意

NIBSC 18/164 ATDB102 參考基因組制劑不適用于人或動物給藥。

用于制備該材料的細胞系經過檢測，經 PCR 檢測，支原體、HIV1、HTLV1、HBV 和 HCV 均呈陰性。該細胞系是 Epstein Barr 病毒 (EBV) 轉化的淋巴母細胞系。 EBV 是英國危險病原體咨詢委員會分類的第 2 類病原體。 EBV 序列可能存在于這些材料中，但 DNA 是使用變性和去除蛋白質的協議制備的，因此可能使病毒失活。但是，無法消除活病毒存活的可能性。與所有生物來源的材料一樣，這種制劑應被視為對健康有潛在危害。應根據您自己實驗室的安全程序使用和丟棄它。此類安全程序應包括佩戴防護手套和避免產生氣溶膠。打開安瓿或小瓶時應小心操作，以避免割傷。

3. 統一

NIBSC 18/164 ATDB102 參考基因組在一項涉及 35 個實驗室和 38 種測試方法的國際合作研究中進行了測試。基因型是從 NGS 和 dPCR 獲得的（表 1）。

4. 制備

生物材料原產國：英國。

編碼安瓿含有大約 5μg 凍干、純化的基因組 DNA，從 ATDB102 人類細胞系中提取。 使用“鹽析”方法提取 gDNA，并在冷凍干燥前在含有 5mg/ml 海藻糖的 Tris-EDTA 緩沖液中稀釋。

5. 儲存

將所有未開封的凍干材料安瓿儲存在 -20°C 或以下。 請注意：由于凍干材料的固有穩定性，NIBSC 18/164 ATDB102 參考基因組可能會在環境溫度下運送這些材料。