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分子印跡及液質(zhì)技術(shù)檢測海水中膝溝藻毒素2&3
膝溝藻毒素2&3 ( gonyautoxin 2&3，GTX2&3）是麻痹性貝類毒素（PSTs）中的一類氨基甲酸酯類毒素，具有毒性強、分布廣、對生物體危害嚴(yán)重等特點。GTX2&3主要由亞歷山大藻屬分泌產(chǎn)生，近幾年在我國臨海區(qū)域經(jīng)常發(fā)生亞歷山大藻赤潮，分泌的貝毒經(jīng)過食物鏈傳遞富集在貝類體內(nèi)，對沿海養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失，并威脅著人類健康及生命的安全。已有研究集中在對貝類等生物樣品中GTXs的檢測，為了及時監(jiān)測有害赤潮發(fā)生后藻毒素GTX2&3的濃度變化及其在海洋環(huán)境中的行為，本研究開發(fā)建立了可應(yīng)用于海水和藻體中GTX2&3測定的樣品前處理方法和液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測方法，并應(yīng)用于實際樣品檢測;首先對遼河入海口近岸海域海水中GTX2&3作了取樣分析，其次測定了實驗室培養(yǎng)的微小亞歷山大藻和塔瑪亞歷山大藻的藻體及藻液中的GTX2&3含量，具體內(nèi)容如下:
(1）實驗中選用氰基柱作為色譜分離柱，利用將高選擇性四極桿的離子過濾與Orbitrap高分辨準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)(HR/AM)測量技術(shù)相結(jié)合的液相色譜-四極桿軌道離子阱(HPLC-Q Exactive)高分辨質(zhì)譜儀作為檢測儀器。通過優(yōu)化液相色譜及質(zhì)譜檢測條件，建立對水樣中的膝溝藻毒素2&3的液質(zhì)聯(lián)用分析方法，檢測限可以達到29.35 ng/L，精密度良好(RSD <10%,n=5)，靈敏度性能進一步得到提升。
(2）以咖啡因作為虛擬模板，采用懸浮聚合法制備了對膝溝藻毒素2&3具有特異吸附性的分子印跡微球，然后采用已制備的分子印跡微球為填料制備了分子印跡固相萃取柱。并對固相萃取的上樣、淋洗等條件做了優(yōu)化，建立了對環(huán)境樣品中 GTX2&3完整的分子印跡固相萃取-液質(zhì)聯(lián)用（MISPE-LC-MS）前處理-檢測方法。通過方法學(xué)驗證發(fā)現(xiàn)其線性相關(guān)性較好（R2>0.99），回收率較高（62.80 % ~ 107.96%)，可有效降低基質(zhì)效應(yīng)的干擾。
(3）針對我國沿海地區(qū)能夠分泌膝溝藻毒素2&3赤潮毒素的塔瑪亞歷山大藻和微小亞歷山大藻展開研究。通過實驗室培養(yǎng)亞歷山大藻，觀察藻在30d生長周期內(nèi)生長密度及分泌毒素的變化，發(fā)現(xiàn)在藻體和濾液中都可檢測到GTX2&3，說明藻毒素除了通過攝食傳遞到較高營養(yǎng)級以外，藻體也會向周圍水體中釋放一定量的毒素。另外對遼河入海口近岸海域海水進行了取樣檢測，目標(biāo)物GTX2&3沒有被檢出。
實驗建立的對水樣中 膝溝藻毒素2&3的液質(zhì)聯(lián)用分析方法可用于海水樣品及生物樣品的檢測，對于監(jiān)測預(yù)警海洋環(huán)境及食品安全具有重要的研究價值和科學(xué)意義。
陳經(jīng)理（銷售）
