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分子印跡及液質技術檢測海水中膝溝藻毒素2&3

膝溝藻毒素2&3 ( gonyautoxin 2&3，GTX2&3）是麻痹性貝類毒素（PSTs）中的一類氨基甲酸酯類毒素，具有毒性強、分布廣、對生物體危害嚴重等特點。GTX2&3主要由亞歷山大藻屬分泌產生，近幾年在我國臨海區域經常發生亞歷山大藻赤潮，分泌的貝毒經過食物鏈傳遞富集在貝類體內，對沿海養殖業造成嚴重的經濟損失，并威脅著人類健康及生命的安全。已有研究集中在對貝類等生物樣品中GTXs的檢測，為了及時監測有害赤潮發生后藻毒素GTX2&3的濃度變化及其在海洋環境中的行為，本研究開發建立了可應用于海水和藻體中GTX2&3測定的樣品前處理方法和液相色譜質譜聯用檢測方法，并應用于實際樣品檢測;首先對遼河入海口近岸海域海水中GTX2&3作了取樣分析，其次測定了實驗室培養的微小亞歷山大藻和塔瑪亞歷山大藻的藻體及藻液中的GTX2&3含量，具體內容如下:

(1）實驗中選用氰基柱作為色譜分離柱，利用將高選擇性四極桿的離子過濾與Orbitrap高分辨準確質量數(HR/AM)測量技術相結合的液相色譜-四極桿軌道離子阱(HPLC-Q Exactive)高分辨質譜儀作為檢測儀器。通過優化液相色譜及質譜檢測條件，建立對水樣中的膝溝藻毒素2&3的液質聯用分析方法，檢測限可以達到29.35 ng/L，精密度良好(RSD <10%,n=5)，靈敏度性能進一步得到提升。

(2）以咖啡因作為虛擬模板，采用懸浮聚合法制備了對膝溝藻毒素2&3具有特異吸附性的分子印跡微球，然后采用已制備的分子印跡微球為填料制備了分子印跡固相萃取柱。并對固相萃取的上樣、淋洗等條件做了優化，建立了對環境樣品中 GTX2&3完整的分子印跡固相萃取-液質聯用（MISPE-LC-MS）前處理-檢測方法。通過方法學驗證發現其線性相關性較好（R2>0.99），回收率較高（62.80 % ~ 107.96%)，可有效降低基質效應的干擾。

(3）針對我國沿海地區能夠分泌膝溝藻毒素2&3赤潮毒素的塔瑪亞歷山大藻和微小亞歷山大藻展開研究。通過實驗室培養亞歷山大藻，觀察藻在30d生長周期內生長密度及分泌毒素的變化，發現在藻體和濾液中都可檢測到GTX2&3，說明藻毒素除了通過攝食傳遞到較高營養級以外，藻體也會向周圍水體中釋放一定量的毒素。另外對遼河入海口近岸海域海水進行了取樣檢測，目標物GTX2&3沒有被檢出。

實驗建立的對水樣中 膝溝藻毒素2&3的液質聯用分析方法可用于海水樣品及生物樣品的檢測，對于監測預警海洋環境及食品安全具有重要的研究價值和科學意義。