抗除草劑大豆356043 ERM-BF425d品系特異性定性和定量PCR體系的建立與評估

在過去的10年中，越來越多的轉基因作物已經批準用于全球性栽培和商業化。然而，隨著越來越多 的轉基因食品、食品配料和添加劑進入市場和餐桌，社會上逐漸出現了爭議之聲，分別涉及食品安全、環 境風險和倫理等問題，這使得40多個國家和地區陸續頒布了轉基因標識法規，來保護消費者的權益。大 豆是一種非常重要的轉基因作物。2007 年，轉基因大豆的種植面積已達到總大豆種植面積的一半以 上。抗除草劑大豆356043 是由基因槍轉化生成的，含有一段孤立的、包含一個改進功能的草甘膦基因片段。這個 片段最初來自地衣芽胞桿菌(Bacillus licheniformis)和大豆(Blycine max L.)的改良原生合成酶基因。目前 只有少數出版物發表了關于抗除草劑大豆356043食品安全與毒理學的報道和一篇356043大豆的實時定量PCR 檢測，尚未見對其側翼序列和檢測方法優化的報道。本研究通過反向PCR技術分離了356043大豆的側 翼序列，并建立了基于其左右側翼序列的品系特異性定性定量PCR檢測體系。 

研究采用反向PCR分離側翼序列，經過篩選采用限制性內切酶BglⅡ消化，產物自連后通過兩組不 同引物擴增分別連接至質粒載體進行側翼序列分析。品系特異定性實驗中，經過多輪巢式PCR引物擴 增分別得到了：位于啟動子和右側翼序列上的，擴增長度為127 bp的引物對R356043-F/R，以及位于終止 子和左側翼序列上的，擴增長度為109 bp的引物對L356043-F/R。兩者檢測限均達到0.05%(基因拷貝數 大約是42)。在Taqman實時定量PCR實驗中，分離獲得的左右側翼序列引物都得到了線性良好的標準 曲線和較高的PCR擴增效率。 

本研究建立的基于左右側翼序列的品系特異性定性和定量PCR體系，可用于抗除草劑大豆356043的精準檢 測。通過獲得準確的核酸片段信息，完善轉基因植物的分子特征庫，為轉基因產品轉化體特異性檢測及 轉基因生物分子檢測技術標準化體系的建立提供了關鍵基礎數據支持。另外，此方法適用于其他側翼 序列未知的轉基因作物，為新轉基因作物品系特異性定性和定量PCR體系的建立與評估提供新的技術 手段。

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